Hello，大家好，小編又和大家見面了。在前期內(nèi)容中，大家已經(jīng)了解氣相色譜法、SPE固相萃取技術(shù)在食品檢測領(lǐng)域中的應(yīng)用。那么，今天小編就帶大家了解另外一種分離分析技術(shù)——HPLC（高效液相色譜法）。

HPLC

HPLC是20世紀(jì)60年代末開始發(fā)展起來的新型高效分離分析技術(shù)，是以液體為流動相，可以解決沸點(diǎn)高、難氣化、熱穩(wěn)定性差、極性強(qiáng)的化合物分析。但在使用過程中經(jīng)常會出現(xiàn)化合物保留時間重現(xiàn)性不好的現(xiàn)象，一般有兩種情況，即保留時間波動和保留時間漂移。前者是指保留時間沒有固定規(guī)律的變化，而后者指保留時間沿著單方向發(fā)生改變。保留時間波動往往與儀器檢測條件、泵穩(wěn)定性密切相關(guān)，保留時間漂移一般是由色譜柱老化、柱效變差所引起。

今天，我們就詳細(xì)地了解一下，影響保留時間漂移的因素有哪些？以及該如何解決？

如若發(fā)生保留時間漂移，首先需要考慮流動相是否已使色譜柱達(dá)到充分的平衡。一般情況下，流動相平衡色譜柱需要10-20個柱體積；但如果流動相中有使用弱酸、弱堿、緩沖鹽和離子對試劑，則需要更長的時間來平衡色譜柱。還有可能是流動相受到污染（水是容易受到污染的流動相成分），存在于流動相中的小分子污染物會在色譜柱中慢慢富集，從而也會造成保留時間的漂移。

不同填料、不同鍵合相的色譜柱，其固定相的穩(wěn)定性也有所區(qū)別。如：普通硅膠填料色譜柱的耐受pH范圍為2-8；聚合物基質(zhì)色譜柱耐受pH范圍在1-14；有機(jī)無機(jī)雜化硅膠填料的耐受pH范圍能達(dá)到1-12.5。即使在推薦的pH范圍內(nèi)使用色譜柱，隨著進(jìn)樣次數(shù)的增加，使用時間的延長，也會造成鍵合相的水解脫落。水解速度與所使用的流動相類型和配體有關(guān)。相比于單官能團(tuán)配體，雙官能團(tuán)配體和三官能團(tuán)配體的鍵合相更加穩(wěn)定；長鏈鍵合相比短鏈鍵合相要穩(wěn)定；烷基鍵合相比氰基鍵合相更加穩(wěn)定。

色譜柱也是分析試驗中的耗材，所以在使用過程中需要按照說明書進(jìn)行相關(guān)維護(hù)。當(dāng)保留時間漂移嚴(yán)重時，很有可能是色譜柱壽命已到，需要及時進(jìn)行更換。

在分析試驗中，液相色譜柱不但會吸附待測組分，同時也會對流動相攜帶的其他物質(zhì)產(chǎn)生吸附。造成色譜柱污染的來源可能是：流動相試劑瓶、流動相本身、儀器連接管路、進(jìn)樣器、泵和密封墊，以及樣品本身所攜帶的雜質(zhì)。樣品基質(zhì)中如果含有保留性很強(qiáng)的污染物，就可能是待測組分保留時間產(chǎn)生漂移的根源。如：環(huán)境水樣中的腐殖酸、血清中的蛋白和脂類化合物以及配藥中的賦形劑等。這些樣品中的污染物會在色譜柱的前端進(jìn)行富集，導(dǎo)致保留時間漂移，同時也會伴有柱壓的升高。

可以通過SPE、QuEChERS等前處理方法對樣品進(jìn)行凈化，去除樣品中的雜質(zhì)和污染物。此外，可以通過使用保護(hù)柱來避免污染物與分析柱的直接接觸，或者通過反沖色譜柱來除去污染物（月旭科技絕大多數(shù)色譜柱都可以進(jìn)行反沖）。

流動相組成成分的變化也會引起保留時間的漂移，如流動相中易揮發(fā)組分的流失、變質(zhì)等。 

于進(jìn)行過封尾處理的反相色譜填料，當(dāng)使用接近100%的水為流動相時，會發(fā)生分離突然喪失、待測組分保留減弱，甚至不保留的現(xiàn)象，此種情況就是疏水坍塌。原因是100%的水相不能浸潤反相色譜填料，挽救的辦法是先用含大量有機(jī)相的流動相浸潤色譜柱，再用分析流動相進(jìn)行平衡。色譜柱長期儲存也會發(fā)生此種現(xiàn)象。使用嵌有極性基團(tuán)的反相柱（如Ultimate polar-RP）或者未進(jìn)行封尾處理的色譜柱可以有效避免發(fā)生坍塌現(xiàn)象。